PRESENTAZIONE

La citometria a flusso è una piattaforma analitica molto diffusa nei laboratori di ricerca che permette di misurare simultaneamente molteplici parametri a livello di singola cellula consentendo un avanzamento nella comprensione delle dinamiche all'interno della cellula e delle comunicazioni tra cellule. Inoltre, la maggiore disponibilità di sonde fluorescenti e strumenti più sensibili ha aumentato il portfolio di approcci statici e funzionali per affrontare la complessità dei sistemi biologici.

OBIETTIVI E CONTENUTI

OBIETTIVI FORMATIVI

Il Corso si propone in prima istanza di fornire una formazione di base relativamente ad una tecnica di ampia diffusione In particolare, il Corso si propone il raggiungimento dei seguenti obiettivi: - conoscenza dei principi su cui si basa la citometria a flusso e della strumentazione; - apprendimento delle tecniche di base; - approfondimento di alcune applicazioni di comune utilizzo; - lettura ed interpretazione dei risultati ottenuti.

MODALITA' DIDATTICHE

Lezioni frontali e discussione di files citometrici 

PROGRAMMA/CONTENUTO

Principi di base della fluorescenza e della interazione luce-particella

Principi di base della citometria: Concetti generali  che sono alla base del funzionamento del citometro a flusso e quali sono i principali parametri ottici misurabili in citometria

Strumentazione: - parte ottica, parte fluidica, parte elettronica

Strumentazione - parte di setting: Procedure di controllo della strumentazione (calibrazione, taratura, linearità); impostazione della soglia di analisi, compensazione

Preparazione del campione: conoscenze di base sulle tecniche piu’ importanti per la preparazione dei campioni da analizzare; campioni freschi, fissati o congelati

Sonde fluorescenti in citometria: Nozioni generali sui coloranti per gli acidi nucleici, per le proteine e per la misura delle principali funzionalità cellulari.

Gestione ed Analisi dei dati generati: Concetti principali connessi con l’analisi di un file citometrico: nozioni sulle diverse modalità di gating; compensazione off-line delle fluorescenze; controllo isotipico ed isoclonico, fluorescence minus one (FMO); Criteri per la valutazione della positività; principali tipologie di rappresentazione dei dati citometrici.

Applicazioni della piattaforma citometrica: studio di marcatori di superficie, intracitoplasmatici ed intranucleari; valutazione della proliferazione cellulare; valutazione dell’apoptosi; cell signalling; citossicità; citometria policromatica;  manipolazione di linee cellulari in coltura e loro preparazione per indagini citometriche (con particolare riferimento alle colture in adesione: distacco, fissazione , ecc); trattamento ed analisi di campioni (biopsie) di tessuti solidi con particolare riferimento alle varie tecniche di disaggregazione; studio di microvescicole. 

TESTI/BIBLIOGRAFIA

Dispense

DOCENTI E COMMISSIONI

Commissione d'esame

DANIELA FENOGLIO (Presidente)

ALESSIA PARODI

LEZIONI

INIZIO LEZIONI

Secondo semestre

Orari delle lezioni

L'orario di questo insegnamento è consultabile all'indirizzo: Portale EasyAcademy

ESAMI

MODALITA' D'ESAME

colloquio e discussione di misure citometrich