| CODICE | 96332 |
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| ANNO ACCADEMICO | 2021/2022 |
| CFU |
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| SETTORE SCIENTIFICO DISCIPLINARE | MED/09 |
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| PERIODO | 2° Semestre |
| MATERIALE DIDATTICO | AULAWEB |
La citofluorimetria a flusso è una piattaforma molto flessibile per la caratterizzazione di cellule e particelle in sospensione, che permette di analizzarne simultaneamente parametri fisici e caratteristiche di fluorescenza per affrontare la complessità dei sistemi biologici. Per la sua versatilità e potenza, la citometria è ampiamente applicata allo studio e conoscenza in molti settori della biologia e della medicina, quindi molto diffusa anche nei laboratori delle aziende farmaceutiche.
Il Corso si propone in prima istanza di fornire una formazione di base relativamente ad una tecnica di ampia diffusione In particolare, il Corso si propone il raggiungimento dei seguenti obiettivi: - conoscenza dei principi su cui si basa la citometria a flusso e della strumentazione; - apprendimento delle tecniche di base; - approfondimento di alcune applicazioni di comune utilizzo; - lettura ed interpretazione dei risultati ottenuti.
La frequenza e la partecipazione alle attività formative (lezioni frontali e frequenza in laboratorio) consentiranno allo studente di acquisire le conoscenze necessarie per affrontare le diverse tipologie ed approcci che applicano misure citometriche in campo biologico.
Nello specifico il Corso si propone il raggiungimento dei seguenti obiettivi:
- conoscenza dei principi fondamentali della citometria a flusso e della strumentazione; - punti di riferimento e linee guida nell’esecuzione di misure citometriche; - approfondimento di applicazioni per studi in campo biologico ; - lettura ed interpretazione dei risultati ottenuti.
Per affrontare efficacemente i contenuti dell’insegnamento sono necessarie le seguenti conoscenze di base: struttura della cellula e dei suoi componenti, conoscenza del ciclo cellulare, nozioni generali dell'interazione luce-materia e del fenomeno della fluorescenza.
L’insegnamento prevede 16 ore di lezioni frontali erogate mediante presentazioni multimediali e presentazione di files citometrici .
Principi di base della fluorescenza e della interazione luce-particella
Principi di base della citometria: Concetti generali che sono alla base del funzionamento del citometro a flusso e quali sono i principali parametri ottici misurabili in citometria
Strumentazione: - parte ottica, parte fluidica, parte elettronica
Strumentazione - parte di setting: Procedure di controllo della strumentazione (calibrazione, taratura, linearità); impostazione della soglia di analisi, compensazione
Preparazione del campione: conoscenze di base sulle tecniche piu’ importanti per la preparazione dei campioni da analizzare; campioni freschi, fissati o congelati
Sonde fluorescenti in citometria: Nozioni generali sui coloranti per gli acidi nucleici, per le proteine e per la misura delle principali funzionalità cellulari.
Gestione ed Analisi dei dati generati: Concetti principali connessi con l’analisi di un file citometrico: nozioni sulle diverse modalità di gating; compensazione off-line delle fluorescenze; controllo isotipico ed isoclonico, fluorescence minus one (FMO); Criteri per la valutazione della positività; principali tipologie di rappresentazione dei dati citometrici.
Applicazioni della piattaforma citometrica: studio di marcatori di superficie, intracitoplasmatici ed intranucleari; valutazione della proliferazione cellulare; valutazione dell’apoptosi; cell signalling; citossicità; citometria policromatica; manipolazione di linee cellulari in coltura e loro preparazione per indagini citometriche (con particolare riferimento alle colture in adesione: distacco, fissazione , ecc); trattamento ed analisi di campioni (biopsie) di tessuti solidi con particolare riferimento alle varie tecniche di disaggregazione; studio di microvescicole.
STRUMENTI A SUPPORTO DELLA DIDATTICA: Tutte le slides utilizzate durante le lezioni saranno disponibili su AulaWeb al termine del ciclo di lezioni in formato PDF insieme ad altro materiale bibliografico
Ricevimento: Il colloquio con i docenti potrà essere richiesto via mail o telefonicamente daniela.fenoglio@unige.it – telefono 010/3533027-3029 daniele.reverberi@hsanmartino.it - telefono 010/5558974-8972(preferibilmente via mail) Gli studi dei docenti sono situati: Dott.ssa Daniela Fenoglio, presso la Direzione del Centro di Eccellenza per la Ricerca Biomedica (CEBR)- Viale Benedetto XV, 7 -16132 Genova Dott. Daniele Reverberi, UO Patologia Molecolare del Policlinico San Martino, Padiglione 15 (IST-sud) – Viale R. Benzi 10 – 16132 Genova
DANIELA FENOGLIO (Presidente)
ALESSIA PARODI
L'esame consiste in una prova orale e si svolge alla presenza dei docenti del Corso. Il colloquio ha una durata di circa 25 minuti e verte sul programma svolto durante le lezioni frontali. Mediante la discussione di diversi argomenti e l’ausilio di immagini di misure citometriche, la Commissione verifica il raggiungimento degli obiettivi formativi previsti dall'insegnamento.
Al termine del colloquio, i docenti della Commissione formulano una votazione finale che deriva dal giudizio globale del candidato.
Il voto di 30/30 con lode verrà conferito quando le conoscenze/competenze della materia sono eccellenti
L’esame orale verterà principalmente sugli argomenti trattati durante le lezioni frontali e avrà l'obiettivo di verificare il raggiungimento del livello adeguato di conoscenze ed approfondimento degli argomenti trattati. In particolare durante il colloquio, lo studente dovrà dimostrare di conoscere: l’anatomia di un citometro e i principi fondamentali della citometria a flusso, le caratteristiche dei principali fluorocromi, i protocolli di preparazione dei campioni per le diverse tipologie di misure citometriche, le linee guida nell’acquisizione ed analisi dei campioni, le principali applicazioni della piattaforma citometrica in biologia e medicina.
La frequenza regolare alle lezioni è fortemente raccomandata