PRESENTAZIONE

La citofluorimetria a flusso è una piattaforma molto flessibile per la caratterizzazione di cellule e particelle in sospensione,  che permette di analizzarne  simultaneamente parametri fisici e caratteristiche di fluorescenza per affrontare la complessità dei sistemi biologici.   Per la sua versatilità e potenza, la citometria è ampiamente applicata allo studio e conoscenza in molti settori della biologia e della medicina, quindi molto diffusa anche nei laboratori delle aziende farmaceutiche.

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OBIETTIVI E CONTENUTI

OBIETTIVI FORMATIVI

L'insegnamento si propone in prima istanza di fornire una formazione di base relativamente ad una tecnica di ampia diffusione In particolare, il Corso si propone il raggiungimento dei seguenti obiettivi: - conoscenza dei principi su cui si basa la citometria a flusso e della strumentazione; - apprendimento delle tecniche di base; - approfondimento di alcune applicazioni di comune utilizzo; - lettura ed interpretazione dei risultati ottenuti.

OBIETTIVI FORMATIVI (DETTAGLIO) E RISULTATI DI APPRENDIMENTO

La frequenza e la partecipazione alle attività formative (lezioni frontali e frequenza in laboratorio) consentiranno allo studente di acquisire le conoscenze necessarie per affrontare le diverse tipologie ed approcci che applicano misure citometriche in campo biologico. 
Nello specifico  il Corso si propone il raggiungimento dei seguenti obiettivi: 
- conoscenza dei principi fondamentali  della citometria a flusso e della strumentazione; - punti di riferimento e linee guida nell’esecuzione di misure citometriche; - approfondimento di applicazioni per studi in campo biologico ; - lettura ed interpretazione dei risultati ottenuti. 

PREREQUISITI

Per affrontare efficacemente i contenuti dell’insegnamento sono necessarie le seguenti conoscenze di base: struttura della cellula e dei suoi componenti, conoscenza del ciclo cellulare, nozioni generali dell'interazione luce-materia e del  fenomeno della fluorescenza.

MODALITA' DIDATTICHE

L’insegnamento prevede 16 ore di  lezioni frontali   erogate mediante presentazioni multimediali e presentazione di files citometrici . 

PROGRAMMA/CONTENUTO

Principi di base della fluorescenza e della interazione luce-particella

Principi di base della citometria: Concetti generali  che sono alla base del funzionamento del citometro a flusso e quali sono i principali parametri ottici misurabili in citometria

Strumentazione: - parte ottica, parte fluidica, parte elettronica

Strumentazione - parte di setting: Procedure di controllo della strumentazione (calibrazione, taratura, linearità); impostazione della soglia di analisi, compensazione

Preparazione del campione: conoscenze di base sulle tecniche piu’ importanti per la preparazione dei campioni da analizzare; campioni freschi, fissati o congelati

Sonde fluorescenti in citometria: Nozioni generali sui coloranti per gli acidi nucleici, per le proteine e per la misura delle principali funzionalità cellulari.

Gestione ed Analisi dei dati generati: Concetti principali connessi con l’analisi di un file citometrico: nozioni sulle diverse modalità di gating; compensazione off-line delle fluorescenze; controllo isotipico ed isoclonico, fluorescence minus one (FMO); Criteri per la valutazione della positività; principali tipologie di rappresentazione dei dati citometrici.

Applicazioni della piattaforma citometrica: studio di marcatori di superficie, intracitoplasmatici ed intranucleari; valutazione della proliferazione cellulare; valutazione dell’apoptosi; cell signalling; citossicità; citometria policromatica;  manipolazione di linee cellulari in coltura e loro preparazione per indagini citometriche (con particolare riferimento alle colture in adesione: distacco, fissazione , ecc); trattamento ed analisi di campioni (biopsie) di tessuti solidi con particolare riferimento alle varie tecniche di disaggregazione; studio di microvescicole. 

TESTI/BIBLIOGRAFIA

STRUMENTI A SUPPORTO DELLA DIDATTICA: Tutte le slides utilizzate durante le lezioni  saranno disponibili su AulaWeb al termine del  ciclo di lezioni in formato PDF  insieme ad altro materiale bibliografico

DOCENTI E COMMISSIONI

Commissione d'esame

DANIELA FENOGLIO (Presidente)

ALESSIA PARODI

LEZIONI

Orari delle lezioni

PRINCIPI DI CITOMETRIA A FLUSSO

ESAMI

MODALITA' D'ESAME

L'esame consiste in una prova orale e si svolge alla presenza dei docenti del Corso. Il colloquio ha una durata di circa 25 minuti e verte sul programma svolto durante le lezioni frontali. Mediante la discussione di diversi argomenti e l’ausilio di immagini di misure citometriche, la Commissione verifica il raggiungimento degli obiettivi formativi previsti dall'insegnamento.

Al termine del colloquio, i docenti della Commissione formulano una votazione finale che deriva dal giudizio globale del candidato.

Il voto di 30/30 con lode verrà conferito quando le conoscenze/competenze della materia sono eccellenti

MODALITA' DI ACCERTAMENTO

L’esame orale verterà principalmente sugli argomenti trattati durante le lezioni frontali e avrà l'obiettivo  di verificare  il raggiungimento del livello adeguato di conoscenze ed approfondimento  degli argomenti trattati. In particolare durante il colloquio, lo studente dovrà dimostrare di conoscere:  l’anatomia di un citometro e i principi fondamentali della citometria a flusso, le caratteristiche dei principali fluorocromi, i protocolli di  preparazione dei campioni per le diverse tipologie di misure citometriche, le linee guida nell’acquisizione ed analisi dei campioni, le principali applicazioni della piattaforma citometrica in biologia e medicina.

Calendario appelli

ALTRE INFORMAZIONI

La frequenza regolare alle lezioni è fortemente raccomandata